Heterologna ekspresija i biokemijska karakterizacija novog proteina pretpostavljene peptidazne aktivnosti iz mahovine Physcomitrella patens (CROSBI ID 382938)
Ocjenski rad | diplomski rad
Podaci o odgovornosti
Jozić, Iva
Abramić, Marija
Vukelić, Bojana
hrvatski
Heterologna ekspresija i biokemijska karakterizacija novog proteina pretpostavljene peptidazne aktivnosti iz mahovine Physcomitrella patens
Sekvenciranje genoma mahovine Physcomitrella patens omogućilo je in silico usporedbe s drugim vrstama. Primjenom bioinformatičkih metoda, u bazi UniProt uočen je protein od 770 aminokiselina (oznaka: A9TLP4) iz P. patens koji sadrži sve očuvane regije porodice dipeptidil-peptidaza III (DPP III), ali umjesto tipičnog motiva HEXXGH posjeduje HECCH. Da bi se okarakteriziralo A9TLP4, provedena je heterologna ekspresija gena PHYPADRAFT_64347. Rekombinantni protein pročišćen je afinitetnom kromatografijom, te su mu određene molekularna masa (88 700 Da) SDS-elektroforezom, i izoelektrična točka (pI = 5, 1), izoelektričnim fokusiranjem. Ispitivanje sintetskih supstrata peptidaza, pokazalo je izrazitu hidrolitičku aktivnost A9TLP4 prema Arg-Arg-2-naftilamidu, karakterističnom supstratu DPP III, koju značajno povećavaju ioni Co2+, a najveća je kod pH = 7, 4 i kod temperature od 55 ˚C. Potpunu inhibiciju enzimske aktivnosti uzrokovali su kelirajući agensi i sulfhidrilni reagens p-hidroksimerkuribenzoat. Dobiveni rezultati ukazuju da je protein A9TLP4 član porodice DPP III s, dosad, najnižom specifičnom aktivnošću i najvišom optimalnom temperaturom djelovanja.
dipeptidil-peptidaza III; hidrolaza; metalopeptidaza
nije evidentirano
engleski
Heterologous expression and biochemical characterization of the new protein with predicted peptidase activity originating from the moss Physcomitrella patens
nije evidentirano
dipeptidyl peptidase III; hydrolase; metallopeptidase
nije evidentirano
Podaci o izdanju
77
22.02.2013.
obranjeno
Podaci o ustanovi koja je dodijelila akademski stupanj
Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb
Zagreb