hrvatski

Dugotrajna kultura stanica koštane srži in vitro -model za ispitivanje uloge koštanih morfogenetskih proteina u hematopoezi.

Koštani morfogenetski proteini (engl. bone morphogenic proteins, BMPs) pripadaju velikoj obitelji bjelančevina (TGF-b) koji sudjeluju u stvaranju i metabolizmu koštanog tkiva. Međutim, zadnjih je godina pokazana njihova ekspresija i u nekoštanom tkivu, uključujući krvotvorno, što govori u prilog mišljenja da BMP imaju široku fiziološku ulogu, te da sudjeluju u diferencijaciji krvotvornih stanica. Ta se činjenica mora dodatno sagledati i u svjetlu hipoteze o zajedničkom podrijetlu koštano - stromalnih i krvotvornih stanica. Stoga, je cilj ovoga rada bila uspostava dugotrajne kulture stanica koštane srži (DKS) in vitro kao potencijalnog modela za ispitivanje ekspresije BMP u dvije različite sastavnice DKS: stromalnih stanica, koje čine potku za razvoj diferenciranih krvotvornih stanica te krvotvornih stanica u različitim stadijima diferencijacije. Model DKS još uvijek je najbliža aproksimacija za definiciju (broja i funkcije) krvotvornih matičnih stanica. Uzorci normalne ljudske koštane srži dobiveni su od davalaca alogene koštane srži za transplantaciju. Mononuklearne stanice su odvojene na fikolu i resuspendirane u komercijalnom mediju za dugotrajnu kulturu (MyeloCult H5100, StemCell Technologies) uz dodatak hidrokortizona u koncentraciji 2x106 st./mL i uzgajane u plastičnim posudama (Falcon - 25 cm2) na 37oC (nakon 4-5 dana na 33oC) u atmosferi s 5% CO2. Jednom tjedno obavljena je zamjena medija i polovice stanica u nadtalogu koje su zasađene u medij za kratkotrajnu kulturu kako bi se utvrdio razvoj i funkcioniranje progenitorskih stanica. Uzgojene su DKS od 7 davatelja alogene koštane srži. Kratkotrajnim kultiviranjem stanica iz nadtaloga dokazano je prisustvo hematopoetske aktivnosti sve do 8. tjedna. U uzorcima 3-5 tjedana starosti imunohistokemijskim bojanjem dokazana je prisutnost BMP2, BMP3, BMP4 i BMP7 u stromalnim stanicama.

dugotrajna kultura stanica koštane srži; koštani morfogenetski proteini

nije evidentirano