hrvatski

TEST PROLIFERACIJE LIMFOCITA S POMOĆU PROTOČNE CITOMETRIJE

Sposobnost proliferacije limfocita u blaste pod utjecajem nespecifičnih mitogena ili antigena u kulturama in vitro određivana je različitim metodama. Jedna od metoda koja se počela koristiti u novije vrijeme je analiza staničnog ciklusa s pomoću propidijrvog jodida na protočnom citometru. Propidijev jodid je boja koja se stehiometrijski veže za dvostruku uzvojnicu DNK i na taj način je pogodan za praćenje sadržaja DNK u staničnom ciklusu. Analizom DNK na protočnom citometru moguće je odrediti pojedine faze staničnog ciklusa kao što su G0/G1, S i G2/M. Praćenjem sinteze DNK (S-faza) određujemo staničnu proliferaciju, tj. količinu de novo nastale DNK nakon stimulacije limfocita mitogenima ili antigenima. Test proliferacije limfocita temelji se na metodi Hartzmana i sur. Stanice se izoliraju iz pune krvi na gradijentu fikol-triozila. Nakon ispiranja u mediju 199 limfociti se podese na koncentraciju 6-8x106/ml. U sterilne pločice za mikrokulturu dodaje se inaktivirani AB serum, pročišćeni limfociti, medij 199, te optimalno razrijeđeni mitogeni ili antigeni. Paralelno se rade po tri uzorka sa svakim mitogenom ili antigenom i tri kontrole bez mitogena ili antigena. Kulture se inkubiraju 64-72 sata na 370C uz konstantne uvjete protoka CO2, zraka i vlažnosti. Nakon inkubacije stanice se prikupe, oboje Vindelovom bojom koja sadrži propidijev jodid i na taj način priređuju za mjerenje na protočnom citometru u programu Cell Quest. Rezultati se analiziraju u programu Mod Fit i izražavaju u relativnim postocima. Test proliferacije limfocita ima široku primjenu u bazičnim i kliničkim istraživanjima. Koristi se u istraživanju kongenitalnih imunoloških defekata, u praćenju imunosupresivne terapije, za određivanje različitih citokina, otkrivanju serumskih čimbenika koji mogu spriječiti ili potaknuti imunološku reakciju, za praćenje imunološkog statusa bolesnika u različitim kliničkim stanjima kao što su operacija, anestezija, transplantacija, maligne bolesti itd.

proliferacija limfocita; mitogen; propidij jodid; kultura stanica in vitro; protočna citometrija

nije evidentirano