hrvatski

Djelovanje okratoksina A i citrinina na razinu ekspresije proteina toplinskog šoka Hsp70 i Hsp27

Okratoksin A (OTA) i citrinin (CTN) su nefrotoksični mikotoksini s potencijalnim kancerogenim djelovanjem koji često istovremeno kontaminiraju hranu. Mehanizmi djelovanja ovih mikotoksina, kao i njihove interakcije u raličitim signalnim putevima u stanici, nisu dovoljno istraženi. Stoga je cilj ovog rada bio istražiti ulogu proteina toplinskog šoka (Hsp70 i Hsp27 proteini) u mehanizmu toksičnog djelovanja OTA-e i CTN-a na stanicama bubrežnog epitela svinje (PK15) kao eksperimentalnom modelu. Primjenom MTT testa određene su koncentracije OTA-e i CTN-a koje za 50% smanjuju vijabilnost PK15 stanica (IC50) kako bi se izabrale sub- i supracitotoksične koncentracije koje će biti primjenjene za određivanje razine ekspresije navedenih proteina. OTA i CTN smanjuju vijabilnost PK15 stanica ovisno o koncentraciji. Pritom se pokazalo da je OTA (IC50 = 14, 0±2, 4 μM) oko 5 puta toksičniji od CTN- a (IC50 = 73, 5±1, 0 μM) za PK15 stanice. Kombinacije koncentracija OTA-e (6 i 10 μM) i CTN- a (30 i 50 μM) imaju aditivan citotoksični učinak na PK15 stanice. OTA i CTN pokazali su različiti učinak na razinu ekspresije Hsp70 i Hsp27 proteina. Nakon 24-satnog tretmana u različitim koncentracijama OTA-e (0, 5, 1, 6 i 10 μM), opaženo je smanjenje ekspresije Hsps-a ovisno o koncentraciji. Učinak na Hsp70 protein je bio izraženiji nego učinak na Hsp27 protein. Uočen je kod tri koncentracije (1 μM, 6 μM, 10 μM), za razliku od učinka na Hsp27 protein koji je uočen kod dvije koncentracije (6 μM i 10 μM). Tretman 10 μM OTA-om tijekom različitih vremena (1, 2, 4, 6, 8, 12 i 24 sata) je pokazao smanjenje ekspresije Hsp70 proteina nakon 12 i 24 sata, dok se smanjenje ekspresije Hsp27 proteina javilo samo kod 24-satnog tretmana. Nakon 24- satnog tretmana CTN-om u različitim koncentracijama (30, 50, 70 i 100 μM), opažena je indukcija ekspresije Hsps-a ovisna o koncentraciji. Učinak je uočen kod oba proteina kod tri koncentracije (50, 70 i 100 μM) te je bio izraženiji kod Hsp70 proteina. Tretman 50 μM CTN- om tijekom različitih vremena (1, 2, 4, 6, 8, 12 i 24 sata) je pokazao indukciju ekspresije Hsp70 proteina kod tretmana u trajanju 12 i 24 sata, dok je indukcija ekspresije Hsp27 proteina zapažena kod 24-satnog tretmana. Nakon 24-satnog tretmana različitim kombinacijama OTA-e i CTN-a (6+30 μM, 6+50 μM, 10+30 μM, 10+50 μM) zabilježena je indukcija ekspresije kod svih korištenih koncentracija, bila je ovisna o koncentraciji te je učinak bio izraženiji na Hsp70 protein. Tretman kombinacijom 10 μM OTA-e i 50 μM CTN-a tijekom različitih vremena (1, 2, 4, 6, 8, 12 i 24 sata) je pokazao indukciju ekspresije Hsp70 proteina kod tretmana u trajanju 12 i 24 sata, dok se indukcija ekspresije Hsp27 proteina javila kod 24-satnog tretmana. Učinak na ekspresiju Hsp proteina je bio veći uz kombinirani tretman nego pri izlaganju pojedinačnim mikotoksinima.

okratoksin A; citrinin; Proteini toplinskog šoka; Hsp70; Hsp27; nefrotoksičnost.

nije evidentirano