hrvatski

Uloga citomegalovirusnih gena u izbjegavanju imunološkog nadzora pomoću rekombinantnih virusa

Mišji citomegalovirus (MCMV) razvio je brojne mehanizme kojima izbjegava kontroli imunološkog sustava domaćina. Virus posjeduje gene čiji produkti mu omogućuju vezivanje Fc fragmenta imunoglobulina, zaustavljanje transporta novosintetiziranih molekula razreda I glavnog sustava tkivne snošljivosti (MHC) te njihovo aktivno uklanjanje sa stanične membrane. U ovom radu opisana je konstrukcija i utvrđena svojstva rekombinantnih virusa s delecijom jednog ili više gena čiji produkti potencijano igraju ulogu u modulaciji imunološkog odgovora domaćina. MCMV fcr-1 gen kodira protein s obilježjima virusnog Fc receptora. Rekombinantni virus MC95.15 s delecijom tog gena raste normalno u kulturi fibroblasta. Nasuprot tome, tijekom in vivo infekcije delecijska mutanta fcr-1 gena dostiže značajno niži titar u usporedbi s divljim tipom virusa i revertantom. Rekombinantni virus MC95.15 zadržava svoj fenotip i u životinjama koje ne luče antitijela, pokazujući da osnovna in vivo funkcija MCMV Fc receptora nije povezana s njegovom sposobnošću da veže imunoglobuline. Kao virusni gen odgovoran za blok u transportu molekula razreda I MHC identificiran je m152 gen. Nakon infekcije stanica delecijskom mutantom m152 gena (MC95.12) transport i sazrijevanje molekula razreda I MHC se nesmetano odvija, te one bivaju efikasno prepoznate i lizirane od strane citotoksičnih limfocita T. Rekombinantni virus MC95.12 raste normalno u kulturi tkiva, ali je njeogva sposobnost replikacije u in vivo uvjetima smanjena. Konstrukcija rekombinantnog virusa s delecijom m3-m6 genske obitelji (MC96.51) pokazala je da su neki od njenih članova odgovorni za nestanak molekula razreda I MHC s površine stanica tijekom infekcije MCMV. Infekcija delecijskom mutantnom m4 gena (MC95.33) nije se razlikovala od infekcije divljim tipom virusa i vodila je smanjenju ekspresije površinskih molekula MHC I. Opisani fenomen bio odsutan nakon infekcije stanica s delecijskom mutantom m6 gena (MC96.61). Gen m6 identificiran je na ovaj način kao gen odgovoran za smanjenje ekspresije MHC I molekula na staničnoj membrani. Niz poboljšanja uvedeno je u tehniku proizvodnje rekombinantnih virusa. Usporedbom različitih selekcijskih pristupa pokazano je da selekcija temeljena na prisustvu gpt i lacZ marker gena pruža optimalne mogućnosti za izolaciju rekombinantnih virusa. Primjenom cre-loxP rekombinacijskog sistema omogućeno je uklanjanje marker gena po zavrđenoj selekciji rekombinantnog virusa i njegova ponovna upotreba u novoj rekombinaciji. Na taj način utvrđeno je da prisustvo i ekspresija marker gena nisu niti u jednom od ispitanih rekombinantnih virusa negativno utjecali na njihove osobine. Pored toga, omogućena je i proizvodnja rekombinantnih virusa s delecijom dvaju ili više neovisnih gena. Rekombinacijski sistem cre-loxP omogućio je uz to i jednostavnu inserciju stranih gena u genom MCMV. Proizvodnja i analiza MCMV rekombinanti omogućila je određivanje uloge nekoliko MCMV gena u izmicanju virusa nadzoru imunološkog sustava, kao i njihov značaj za replikaciju virusa u organizmu domaćina.

citomegalovirus

nije evidentirano