Analiza polimorfizma ljudskog kromosoma 9 regije p21 (CROSBI ID 334973)
Ocjenski rad | diplomski rad
Podaci o odgovornosti
Pokupčić, Nikola
Levanat, Sonja
Levanat, Sonja
hrvatski
Analiza polimorfizma ljudskog kromosoma 9 regije p21
Analizom DNA 20 zdravih osoba utvrdio sam kolika ja heterozigotnost za biljege IFNA, D9S126 te za D9S104. Rezultati, iako dobiveni na maloj skupini usporedivi su s podacima u literaturi. Zato te biljege smatram informativnima za ispitivanu regiju9p21. PCR reakcijom iz parafinskih rezova moguće je dobiti zadovoljavajuće rezultate za daljnje molekularno genetičke analize mijenjanjem uvjeta izolacije DNA. Bolje rezultate dobivao sam stavljanjem predmetnih stakalca u kupelj na 37°C 30 minuta da se parafin otopi. Osim toga u postupku sam ponavljao korak s ksilenom radi boljeg odstranjivanja tkiva (pročišćavanje). U lančanoj reakciji polimerazom mijenjao sam više čimbenika. Mijenjanjem koncentracije DNA, broja ciklusa te koncentracije enzima nisam bitno utjecao na kvalitetu i količinu produkta PCR-a. Zato sam pribjegao tzv kompletima za PCR na kuglicama (Ready to Go, Amersham Pharmacia Biotech Inc) u kombinaciji s pročišćavanjem DNA te dodatnim taloženjem. Tako su dobiveni bolji rezultati, a kada sam naposljetku uz ta tri čimbenika pridodao nižu temperaturu sparivanja rezultati su bili najbolji. Svaku PCR reakciju sam provjeravao na agaroznom gelu. Nakon toga sam produkte PCR-a stavljao na elektroforezu u gelu poliakrilamida. Zbog veće moći razdvajanja odsječaka DNA mogao sam utvrditi prisutnost pojedinih alela za sva tri biljega te ih usporediti s podacima u literaturi. Za određivanje haplotipa kojim se bolest prenosi u obitelji te za dublju analizu obiteljskog melanoma, potrebno je imati veći broj oboljelih u jednoj obitelji. Uzorci iz mog rada ne zadovoljavaju taj uvjet. Stoga, podaci koje sam dobio samo upućuju kako se može odrediti haplotip odgovoran za nastanak bolesti.
heterozigot; biljeg; izolacija; lančana reakcija polimerazom
nije evidentirano
engleski
Polymorphisms of human chromosome 9 region p21
nije evidentirano
heterozygosity; marker; isolation; polimerase chain reaction
nije evidentirano
Podaci o izdanju
39
18.06.2002.
obranjeno
Podaci o ustanovi koja je dodijelila akademski stupanj
Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb
Zagreb