hrvatski

Potvrđivanje vezanja Zn, Cu i Cd na metalotioneine u citosolu jetre vardarskog klena (Squalius vardarensis Karaman) korištenjem visoko djelotvorne tekućinske kromatografije i masene spektrometrije

Metalotioneini (MT) su citosolski proteini odgovorni za homeostazu esencijalnih metala, poput Zn i Cu, i detoksikaciju neesencijalnih metala, poput Cd. Cilj ovoga istraživanja bio je potvrditi vezanje ova tri metala na MT u citosolu jetre vardarskog klena (Squalius vardarensis Karaman) uzorkovanog u listopadu 2012. godine u Krivoj reci, onečišćenoj rudarskim otpadom, u sjeveroistočnoj Makedoniji. Primijenjeni analitički pristup sastojao se od sljedećih koraka: (1) usporednog frakcioniranja citosolskih proteina iz jetre klena i standarda MT na osnovu njihove molekulske mase primjenom visokodjelotvorne tekućinske kromatografije s isključenjem po veličini (SE-HPLC), koje je bilo praćeno određivanjem koncentracija odabranih metala u tako dobivenim proteinskim frakcijama pomoću spektrometra masa s induktivno spregnutom plazmom (ICP-MS) ; (2) frakcioniranja proteina prema molekulskoj masi pomoću ultrafiltera, sa svrhom odvajanja proteina molekulske mase >30 kDa, koje je bilo praćeno daljnjim frakcioniranjem tih proteina pomoću anionsko- izmjenjivačke kromatografije (AEX-HPLC) te određivanjem raspodjele profila metala u tako dobivenim frakcijama primjenom ICP-MS-a ; (3) analiziranja proteinskih frakcija dobivenih dvodimenzionalnim frakcioniranjem, koje sadrže metale Zn, Cu i Cd, pomoću masene spektrometrije (ESI-Q-TOF MS) s ciljem potvrđivanja prisutnosti MT. Primijenjeni analitički pristup omogućio je identifikaciju MT u proteinskim frakcijama citosola jetre klena koje sadrže Zn, Cu i Cd, što je u skladu s ulogom MT u homeostazi i detoksikaciji metala. Analitički pristup koji se zasniva na kombiniranoj primjeni različitih analitičkih metoda, poput dvodimenzionalnog razdvajanja proteina (SE-AEX-HPLC) povezanog s određivanjem metala (ICP-MS) i identifikacijom proteina (ESI-MS) predstavlja brz, osjetljiv i pouzdan alat za prepoznavanje citosolskih proteina koji vežu metale.

metalotionein ; jetra ; vardarski klen ; visoko djelotvorna tekućinska kromatografija ; masena spektrometrija

USB