hrvatski

Konstrukcija plazmidnog vektora za transformaciju kvasca Pichia pastoris

Pichia pastoris često je korišteni mikroorganizam u biotehnološkoj proizvodnji heterolognih proteina. Zbog mogućnosti rasta do visokih staničnih gustoća važna je mogućnost njegove primjene u dobivanju kemikalija na ekološki prihvatljiv i ekonomski isplativ način. U ovom radu konstruiran je plazmidni vektor pogodan za transformaciju kvasca Pichia pastoris koji nosi gen za rekombinantni protein Ccw12XR iz kvasca Saccharomyces cerevisiae. Rekombinantni gen se sastoji od dijela koji kodira za enzim ksiloza reduktazu (XR) i dijela koji kodira za protein Ccw12 stanične stijenke kvasca S. cerevisiae. Rekombinantni gen umnožen je PCR metodom i ugrađen TA ligacijom u plazmidni vektor pGEM®-T Easy. Plazmid je umnožen u kompetentnim stanicama E. coli, nakon čega je iz plazmida izrezan rekombinantni gen CCW12XR korištenjem SapI restrikcijskog enzima. Naposljetku je CCW12XR gen ligiran s lineariziranim plazmidom pBSY3Z. Uspješnost ligacije je, nakon umnažanja plazmidnog vektora u kompetentnim stanicama E. coli, provjerena restrikcijom pomoću odabranih restrikcijskih enzima i elektroforezom na agaroznom gelu.

CCW12XR ; ksiloza reduktaza ; Pichia pastoris ; plazmidni vektor

nije evidentirano