hrvatski

Konstrukcija i ekspresija mutiranih inačica gena SCW4 kvasca Saccharomyces cerevisiae

Protein Scw4 veže se kovalentno i nekovalentno na staničnu stjenku kvasca Saccharomyces cerevisiae, no nije poznato na koji se način kovalentno veže. U potrazi za regijom potencijalno odgovornom za vezanje napravljena je delecijska analiza gena SCW4. Mutacije u konstruktima uvodene su pomoću PCR-a metodom megapočetnice koristeći plazmid pBG1805 SCW4 kao DNA kalup. U ovom radu napravljena su i ispitana dva delecijska konstrukta, Δ202SCW4 i Δ231SCW4, u kojima su deletirani dijelovi gena koji kodiraju za dio sekvence proteina od signalne sekvence do 202.-og, odnosno 231.-og aminokiselinskog ostatka. Konstrukti su ligirani u kvaščev plazmidni vektor YEp351 te su dobivenim plazmidima transformirane stanice kvasca. Kvasci su uzgajani u selektivnoj podlozi za uzgoj u uvjetima indukcije GAL1 promotora s obzirom da na to da GAL1 promotor na plazmidu YEp351 kontrolira ekspresiju mutiranih inačica SCW4 gena. Nakon uzgoja provedena je izolacija proteina stanične stijenke, proteini su razdvojeni u gelu SDS-elektroforezom po Laemmli-u te je pomoću Western blot metode potvrđena ekspresija i nekovalentno vezanje mutiranog Scw4 proteina na staničnu stijenku kvasca.

PCR, Saccharomyces cerevisiae, Scw4, stanična stijenka

nije evidentirano