hrvatski

In silico analiza i antiproliferativno djelovanje novih hibrida pirimidin-2, 4-dion-1, 2, 3-triazola

Cilj rada je predviđanje mogućih bioloških meta hibrida 1, 2, 3-trizola metodama molekulskog modeliranja te utvrđivanje mjesta i načina vezivanja aktivnih spojeva u odabranoj meti in silico metodama. U radu je ispitana antiproliferativna aktivnost osam derivata hibrida 1, 2, 3-triazola na pet različitih tumorskih staničnih linija, i svi su pokazali antiproliferativni učinak in vitro sa značajnom citostatskom aktivnošću. Između N, N-1, 3-bis- (1, 2, 3-triazol)-5-bromouracil hibrida značajnu citostatsku aktivnost imaju p-fluor(1), o- fluor(3) i p-klorfenil(2) supstituirani 1, 2, 3- triazoli koji su pokazali jaki inhibitorni utjecaj na rast stanica ispitanih na staničnim linijama HepG2 i HeLa. Inhibicija proliferacije zapažena je pri mikromolarnoj koncentraciji ispitanih spojeva, i bila je jača od inhibicije proliferacije stanica istih staničnih linija inkubiranih pod istim uvjetima s 5-fluoruracilom kao referentnom supstancom. Kod ispitanih spojeva nije uočena mitohondrijska toksičnost. Osim metoda stanične biologije u radu je rabljen program PASS za ispitivane spojeve kako bi se odredila moguća biološka meta. Detekcija biološke mete zasniva se na strukturi ispitivanih spojeva te na strukturi bioloških makromolekula iz proteinskih baza. Analiza je pokazala da je za snažno antitumorsko djelovanje spojeva 1, 2 i 3 vrlo vjerojatno odgovorna inhibicija tirozin kinaze Wee1. Uporabom programa Autodock Vina spojevi 2 i 3 uklopljeni su u kristalnu strukturu kinaze Wee1 koja je preuzeta iz proteinske baze podataka [PDB: 5v5y]. Analiza molekulskog uklapanja pokazala je da se spojevi 2 i 3 vežu u ATP vezno mjesto kinaze Wee1 jednako kao i spoj MK-1775 koji je snažni i specifični inhibitor kinaze Wee1 (IC50 = 5, 2 nM). Citostatski učinci spojeva 2 i 3 mogu se pripisati inhibiciji kinaze Wee1, "čuvara" zastoja G2-M kontrolne točke staničnog ciklusa. Osim toga, za spojeve 2, 3 i MK-1775 metodom Western blota ispitan je učinak na fosforilaciju proteina, mogućih supstrata kinaze Wee1. Tako je u konačnici dokazano da se ukupna fosforilacija izoliranih proteina nakon stimulacije perifernih mononuklearnih stanica znatno smanjuje u prisutnosti specifičnog inhibitora MK-1775 kao i ispitivanih spojeva 2 i 3, što jasno ukazuje na moguću inhibiciju kinaze Wee1. S obzirom da je ciklin ovisna kinaza Cdk1 supstrat za kinazu Wee1, u radu se molekulskim modeliranjem analizirao utjecaj enzimske aktivnosti kinaze Wee1 na fosforilaciju kinaze Cdk1.

1, 2, 3-triazol, pirimidin, molekulska hibridizacija, antitumorska aktivnost, kinaza Wee1, molekulsko uklapanje

nije evidentirano