engleski

Development of a new method for identification of uropathogenic E. coli

Infekcije urinarnog trakta uzrokovane uropatogenom E. coli su veoma česte i predstavljaju veliki zdravstveni problem zapadnog svijeta. Mikrobiološki postupci dokazivanja uropatogene E. coli koji su danas u uporabi dugotrajni su i složeni. Svrha ovog rada bila je uvesti novu metodu kojom bi se dijagnostika UPEC ubrzala, pojednostavila i pojeftinila. Na površini uropatogene E. coli nalaze se P fimbrije, lektini kojima se bakterija specifično veže na Gal-α -Gal nastavke prisutne na membranskim glikolipidima uroepitelnih stanica. Gal-α -Gal strukture prisutne su u velikim količinama i u glikanima golubljeg ovalbumina, koji je korišten u ovoj metodi kao specifični ligand za UPEC. U radu je umjesto UPEC korišten lektin griffonia simplicifolia lectin I koji specifično prepoznaju istu šećernu strukturu (Gal-α -Gal-galaktozid). Postupak metode temelji se na modificiranoj ELISA-metodi . Uprvom koraku bunarići se oblažu golubljim ovalbuminom. Preostala slobodna mjesta zasićuju se goveđim serumskim ovalbuminom čime se sprječava nespecifično vezanje. Lektin GSL I ( UPEC) veže se na galabiozne strukture golubljeg ovalbumina. Vezani lektin (UPEC) detektira se pomoću oligosaharidnih struktura dobivenih deglikozilacijom golubljeg ovalbumina, koje su obilježene digoksinom. Digoksin se detektira specifičnim protutijelima obilježenim alkalnom fosfatazom. Intenzitet obojenog produkta (p-nitrofenola) izravno je proporcionalan koncentraciji lektina (E. coli). Optimiranjem vremena inkubacije pojedinih supstanci utvrđeno je da je za vezanje golubljeg ovalbumina, goveđeg serumskog albumina i šećernih struktura obilježenih digoksinom potrebno 4 sata pri 37°C, za vezanje lektina 14 sati pri 25°C, a protutijela napram digoksina 2 sata pri 25°C. Najmanja koncentracija golubljeg ovalbumina potrebna za pozitivnu reakciju je 10 μ g/ml, a koncentracija oligosaharidnih struktura dobivenih deglikozilacijom golubljeg ovalbumina obilježenih digoksinom dovoljna za pozitivnu reakciju je 0.01 nmol/jažici. U području koncentracija lektina 1-10 μ g/ml intenzitet obojenja izravno ovisi o koncentraciji lektina. Ovi rezulltati predstavljaju temelj daljnih istraživanja potrebnih za utvrđenje nove, jednostavne, jeftine metode za dokazivanje UPEC.

uropathogenic E. coli

nije evidentirano