hrvatski

Gubitak heterozigotnosti tumor supresorskog gena p53 u karcinomima bubrega

Namjera ovog rada bila je odgovoriti na pitanje da li su geni p53 i c-K-ras promjenjeni u tumorima bubrega, te uspostaviti jednostavne molekularno-genetičke metode za analizu promjena u ovim genima. Genomsku DNA izolirali smo iz 43 uzorka tumora bubrega sa odgovarajućim zdravim tkivom, te analizirali promjenu u 12. kodonu gena c-K-ras odnosno gubitak heterozigotnosti (LOH) gena p53. Točkastu mutaciju gena c-K-ras u 12. kodonu ispitivali smo lančanom reakcijom polimeraze (PCR) koristeći odgovarajuće oligonukleotide i provođenjem reakcije raznolikost dužine odsječaka DNA dobivenih cijepanjem sa restrikcijskom endonukleazom Bst N1. Korištenjem specifičnih početnica za 4. ekson i 6. intron ispitali smo gubitak heterozigotnosti tumor supresorskog gena p53. Odsječke dobivene lančanom reakcijom polimeraze (PCR) i cijepanje umnoženih odsječaka DNA s restrikcijskim endonukleazama za 4. ekson sa Bst U 1 i za 6. intron sa Msp 1 odredili smo gubitak heterozigotnosti (RFLP/LOH). U tumorima bubrega nije dokazana točkasta mutacija u genu c-K-ras, dok je gubitak heterozigotnosti (LOH) tumor supresorskog gena p53 dokazan. Od 43 uzorka tumora bubrega za 4. ekson gena p53 gubitak heterozigotnosti nađen je od 18 (41,90%) informativnih (heterozigotnih) uzorka samo u jednom uzorku (uzorak 7), dok za 6. intron nismo utvrdili gubitak heterozigotnosti u 6 (13,95 %) informativnih (heterozigotnih) uzoraka. Na temelju dobivenih rezultata može se pretpostaviti da razvoj tumora bubrega vjerojatno nije posljedica aktivacije gena c-K-ras zbog mutacije u 12. kodonu niti inaktivacije gena p53 zbog gubitka heterozigotnosti (LOH-a). Međutim, iako u radu nisu pokazane mutacije ne možeo isključiti mogućnost razvoja tumora bubrega o genskoj izmjeni gena c-K-ras i p53. Ukazivanjem potrebe radi sve većeg kliničkog značaja za daljnjim ispitivanjem ovih i drugih gena kod razvoja tumora bubrega biti će predmetom našeg daljnjeg istraživanja. Međutim, metode koje smo primjenili za ciljanu analizu točkastih mutacija i gubitak heterozigotnosti brze su i pouzdane te prikladne za kliničke pa i rutinske analize, čak i kad je riječ o arhivskim uzorcima tkiva.

gubitak heterozigotnosti; tumor-supresor gen; p53; karcinom bubrega

nije evidentirano