hrvatski

Dijagnostika bakterijemije i fungemije pomoću real-time PCR testa (Light cycler septifast test)

Light Cycler SeptiFast Test je test kojim se in vitro amplificira nukleinska kiselina bakterija i gljiva iz krvi bolesnika. Brzom detekcijom bakterijemije/fungemije rano započinje antibiotska terapija, što znatno smanjuje morbiditet i mortalitet povezan sa sepsom. Uporaba antibiotika širokog spektra time se također smnjuje. Test je pomoć u dijagnostici septičkog sindroma i tumači se uz kliničku sliku bolesnika, laboratorijske pokazatelje infekcije i standardne (tradicionalne) mikrobiološke postupke. Test se temelji na tri procesa: obradi uzorka i izolaciji DNA, PCR amplifikaciji ciljne DNA u realnom vremenu i automatiziranoj identifikaciji vrste. Osobitost PCR amplifikacije u realnom vremenu je istodobno odvijanje reakciaj amplifikacije i detekcije amplikona u reakcijskoj kapilari. Detekcija amplikona postiže se fluorescencijom nastalom „ FRET“ principom (Fluorescent Resonance Energy Transfer), Po manualnom određivanju temperature taljenja (Tm), software provodi identifikaciju vrste prema SeptiFast Master popisu. U Kliničkom zavodu za kliničku i molekularnu mikrobiologiju KBC Zagreb, tijekom razdoblja 04.01.2007. – 09.01.2008. obrađeno je 314 uzoraka krvi. Od ukupnog broja uzorakaPCR pozitivnih je bilo 92 (29%). Po učestalosti detekcije, najčešća gram negativna bakterija je Pseudomonas aeruginosa, gram pozitivna Staphylococcus aureus, a gljiva Candida parapsilosis. Istodobno s uzorkom krvi za SeptiFast prikupljana je i krv za hemokulturu (HK). Rezultati analize uzoraka krvi obrađenih PCR metodom i hemokulturom prikazani su u Tablici 1. Pozitivan PCR i negativna HK govore o većoj osjetljivosti PCR postupka u odnosu na HK, slabijem rastu nekih mikroorganizama u HK i u slučaju polimikrobne infekcije, prevlasti jedne vrste mikroorganizma u HK. Negativan PCR i pozitivna HK govore o vrsti mikroorganizama koja se ne nalazi na postupak u odnosu na volumen krvi hemokulture.

bakterijemija; fungemija; real-time PCR

nije evidentirano