Alkohol dehidrogenaza (E.C. No. 1.1.1.1) se može pronaći u velikim količinama u mikroorganizmima i jetri životinja. Ima važnu ulogu u nekoliko fizioloških funkcija uključujući i metabolizam alkohola. Jedan od najboljih izvora ovog enzima su pekarski i vinski kvasac. Enzim ADH je važan jer oksidira sve primarne alkohole, a isto tako može reducirati aldehide, kao npr. acetaldehid i gliceraldehid [1]. Enzimi kvasca su potencijalni industrijski biokatalizatori, zbog niske cijene kvasca, jednostavnog uzgoja stanica kvasca i kvaščeve nepatogenosti. Posebno je važna nepatogenost kvasca jer se u današnje vrijeme sve više pažnje poklanja zaštiti i očuvanju okoliša. U ovom je radu izoliran enzim alkohol dehidrogenaza (YADH) iz stanica komercijalnog vinskog kvasca. Stanice kvasca razbijene su kugličnim mlinom nakon čega su kuglice i ostaci stanične stijenke izdvojeni centrifugiranjem pri 4 500 i 14 000 okr/min. U ovako dobivenom supernatantu su taloženi proteini uz dodatak amonijevog sulfata. Do taloženja alkohol dehidrogenaze dolazi u intervalu od 40-70% zasićenja. Nakon taloženja, koje je provedeno kako bi se izdvojilo što više neželjenih proteina prisutnih u uzorku, frakcija koja je sadržavala alkohol dehidrogenazu je pročišćavana gel filtracijom na kolonama punjenim Sephadex-om G-50 i Sephadex-om G-100. Ovako pripremljen biokatalizator je korišten u reakciji oksidacije heksanola u heksanal. Budući da je ADH enzim kojemu je neophodan koenzim NAD+(H) za katalitičku aktivnost, potrebno je provesti regeneraciju koenzima koja je u ovom radu provedena u reakciji redukcije acetona. [1] Madhusudhan et al, Biochemical Engineering Journal, 2008, 38, 414–420

Biotehnologija